暗激酶组之外的磷酸酶与DUB靶点突围

当已获批的 85 个激酶抑制剂仍聚集在不足一成的激酶组靶点上时，药物发现的目光自然会投向更广阔的酶学版图。去泛素化酶（DUB）与磷酸酶是其中两块逻辑相似的高地：它们分别是泛素化与磷酸化两大翻译后修饰的"逆向执行者"，与无数疾病通路直接关联，却又因催化口袋的保守与极性而长期被视为难成药。如今，随着变构抑制与共价化学的突破，这两类靶点正在迎来属于自己的突围时刻。

磷酸酶：SHP2 变构抑制的示范效应

蛋白磷酸酶与激酶构成磷酸化调控的一体两面，其底物遍布 RTK 信号、细胞周期与代谢调控。磷酸酶难成药的原因很具体：催化口袋富含正电残基、极性强，正构抑制剂往往带电性高、膜通透性差，且各家族成员口袋高度相似导致选择性堪忧。SHP2（PTPN11）变构抑制剂的成功提供了教科书式的破题思路——研究者不再强攻催化口袋，而是结合在 N-SH2 结构域与催化域之间的变构界面，将酶锁定在自抑制构象。这一策略在 RTK 驱动的肿瘤中展现出明确疗效，并推动多个同类分子进入临床开发，磷酸酶"不可成药"的成见就此瓦解。代谢领域的 PTP1B 等靶点也重新进入活跃评价管线。

磷酸酶抑制剂的实验评价需贴合其作用模式。初筛可用 DiFMUP 等小分子磷酸底物实现高通量读数；确证阶段应切换到磷酸化肽段或蛋白底物，以贴近生理情境；对变构机制的确认，则可借助 SPR 等生物物理手段直接定位结合位点，辅以酶动力学分析区分竞争性、非竞争性与混合型抑制。功能与结合证据的互证，是这类新靶点立项的底气所在。

DUB：泛素链的选择性阅读者

泛素-蛋白酶体系统承担真核细胞大部分蛋白质的降解，而约 100 种 DUB 负责反向水解泛素链、稳定特定底物。DUB 的疾病关联近年愈发清晰：USP7 通过稳定 MDM2 抑制 p53 通路，USP28 参与稳定 MYC，OTUD7B 调控 NF-κB 炎症信号，UCHL1 与神经退行性疾病相关。从机制上讲，抑制一个致病性 DUB，等价于恢复特定致病蛋白的降解——这为那些难以直接靶向的蛋白（如转录因子）提供了间接干预的通道。

DUB 评价的技术要点在于链型选择性。便捷的初筛采用 Ub-AMC 荧光底物：水解速率直接报告酶活性，抑制剂使信号斜率下降。但 DUB 生物学功能的精髓在于对不同连接类型泛素链的偏好——K48 链主要导向蛋白酶体降解，K63 链与 M1 线性链则更多参与信号复合体组装。因此深入的评价需使用双泛素（di-Ub）探针，以凝胶或质谱分析各链型的水解谱。公开信息显示，国内已有平台将 DUB 纳入酶学筛选体系，爱思益普的酶学靶点版图即覆盖去泛素化酶与蛋白酶等蛋白稳态调控类别，可支持此类靶点从方法开发到化合物评价的全流程。

突围的方法论：评价体系先行

梳理磷酸酶与 DUB 的突围历程，一条方法论主线清晰可见：每一个"不可成药"标签的撕下，都始于评价体系的先行建立——可靠的重组蛋白、贴合机制的底物与读数、生物物理手段的结合模式确认、细胞水平的通路干预验证，终汇入疾病模型的表型确证。诱导邻近技术还在拓展想象力的边界：DUBTAC 概念尝试招募 DUB 去主动稳定有益蛋白，把逆向调控本身变成治疗策略。从公开布局看，爱思益普围绕从靶点验证到临床前候选分子的发现链条配置了从头蛋白表达、SPR 生物物理分析等支撑能力，恰好覆盖上述评价路径的关键节点。对有志于新靶点的团队而言，这一领域的竞争壁垒不在靶点名单，而在谁能更早把"酶学—细胞—生物物理"三层证据组合成可决策的数据包——评价体系就位之时，才是靶点突围真正开始之日。