FRET（荧光共振能量转移）是基于邻近的检测技术：当供体荧光基团与受体荧光基团距离在 1–10 nm 范围内时发生能量转移，产生可检测的荧光信号。FRET 广泛用于细胞水平研究，实时观测蛋白-蛋白相互作用、构象变化与信号事件，适合监测动态细胞过程与分子的空间分布。
TR-FRET（时间分辨 FRET）引入镧系元素供体（如铕 Eu³⁺、铽 Tb³⁺），其荧光寿命长：激发后延迟一段时间再测量供体与受体荧光，使非特异短寿命背景荧光充分衰减，显著提升信噪比，适合高通量筛选。
HTRF（均相时间分辨荧光）是 TR-FRET 的商品化形式，将时间分辨荧光与比值检测结合：铕穴合物供体与 XL665 受体产生可测量的比值信号，校正加样与孔间差异，提供稳健、可重复的测量，广泛用于受体-配体结合、蛋白相互作用与胞内信号分析。
TR-FRET/HTRF 在 GPCR 信号研究中的成熟应用。
测量胞内第二信使 cAMP 水平，常用于 Gαs 与 Gαi 偶联受体，在活细胞中定量受体反应，支持激动剂与拮抗剂筛选。
检测 IP1 积累以衡量 Gαq 偶联 GPCR 活性，支持 Gαq 介导的信号转导与配体活性分析。
通过标记 GPCR 并以 FRET 读出配体结合，支持配体筛选与结合动力学表征。
TR-FRET 在药物发现高通量筛选中尤为有效，包括 GPCR 信号与激酶相互作用等研究——标准 FRET 中的背景噪声往往会掩盖弱信号，而时间分辨窗口可将其有效分离。
FRET 是基础的能量转移检测（1–10 nm 距离窗）；TR-FRET 用镧系长寿命供体 + 延迟读取，大幅降低背景；HTRF 是商品化的 TR-FRET，加入双波长比值读出，进一步校正实验误差。三代技术灵敏度与稳健性依次提升。
适合背景干扰较强的体系与高通量筛选：如 GPCR 信号（cAMP、IP1、Tag-Lite 结合）、激酶相互作用、蛋白-蛋白相互作用等，弱信号也能在时间分辨窗口内被准确读出。
cAMP 检测回答 Gαs/Gαi 偶联受体的激活或抑制；IP1 检测回答 Gαq 偶联受体活性；Tag-Lite 直接测量配体-受体结合与动力学。三者结合可完整刻画 GPCR 配体的功能谱。
均相体系无需洗涤，兼容 96/384 孔板，适合从单点确证到高通量筛选的规模设计；可按项目需求配置浓度梯度与动力学读数。
