PARP抑制剂与耐药：合成致死的攻防战

合成致死：一场精妙的"以毒攻毒"

在肿瘤靶向治疗中，PARP 抑制剂是"合成致死"理念成功的实践。PARP（多聚 ADP 核糖聚合酶）是 DNA 单链断裂修复的关键酶，而 BRCA 基因则负责同源重组修复（HRR）这条双链断裂修复通路。正常情况下，细胞靠这两条通路"互为备份"；但当 BRCA 发生突变、HRR 通路失灵时，细胞就只能依赖 PARP。此时若再用 PARP 抑制剂"掐断"这的退路，细胞便会在 DNA 损伤中走向死亡——这就是"合成致死"：单独失活哪一个都不会致命，两者同时失活才会杀死细胞。

这一机制，让 PARP 抑制剂在 BRCA 突变的卵巢癌、乳腺癌等肿瘤中展现出惊人的疗效。但与此同时，一个更现实的问题也随之而来：耐药。随着 PARP 抑制剂在临床上的广泛应用，越来越多的患者出现了耐药，如何评价新一代 PARP 抑制剂能否突破耐药、如何在更广的人群中筛选获益者，成为研发的下一个焦点。

一套"酶法 + 捕获"的精准检测体系

评价 PARP 抑制剂，核心是要回答两个问题：它能不能抑制 PARP 的酶活性？它能不能"捕获"PARP 在 DNA 上形成稳定的复合物？

针对个问题，爱思益普建立了 PARP 酶法实验：将组蛋白涂覆在平板上，加入 PARP 蛋白（PARP1/2/3 需要单链 DNA 断裂才能激活）以及生物素标记的 NAD，随着反应进行，PARP 在组蛋白上形成生物素标记的 ADP 核糖链，再用链霉亲和素标记的 HRP 与超灵敏试剂读出信号，从而定量 PARP 的酶活性。针对第二个问题，平台建立了 PARP 捕获实验：当 PARP 与 DNA 和 NAD 形成复合物后会随 ADP 核糖链的产生而与 DNA 解离，若加入抑制剂，PARP 便不会解离，此时通过供体与受体标签之间的荧光共振能量转移（TR-FRET）信号，就能检测抑制剂的"捕获"能力。值得一提的是，PARP 抑制剂的"捕获"能力（trapping）被认为是其细胞毒性与临床疗效的关键决定因素，因此这项检测具有独特的价值。平台在 PARP 选择性筛选方面积累了丰富经验，并已验证奥拉帕尼、AZD5305 等代表性分子的测试数据。

一个 70 株细胞系的耐药评价 panel

酶学层面的活性，终要落到细胞与耐药上。爱思益普针对 PARP 靶点建立了 PARP 抑制剂筛选细胞 panel，覆盖 9 种癌症、共 70 种肿瘤细胞系，其中包括 PARP 敲除细胞系、BRCA 敲除细胞株、BRCA 过表达细胞系、BRCA 突变细胞系、PARP 抑制剂耐药细胞系与一般肿瘤细胞系。这套 panel 可用于 7-14 天的化合物测试，支持单药或联合用药，还能根据客户需求定制。此外，与 PARG（多聚 ADP 核糖水解酶）相关的生化与细胞学实验也已建立——作为 ADP 核糖链的水解酶，PARG 同样是 DNA 损伤修复中的重要一环，为"绕过 PARP 耐药"提供了新的切入视角。对研发者而言，这套"酶法—捕获—细胞 panel—耐药"的完整证据链，正是评估新一代 PARP 抑制剂价值的核心依据。