nanoDSF-TSA：无标记读出蛋白的热稳定性

蛋白的"熔解温度"，稳定性的温度计

一个候选蛋白能不能成药、一个抗体批次稳不稳定、一种制剂配方合不合适，往往都指向同一个问题：这个蛋白"耐不耐热"。在生物物理的世界里，熔解温度（Tm）就是那把衡量蛋白热稳定性的标尺——温度升高时，蛋白从折叠状态逐渐去折叠，Tm 值越高，说明结构越稳定。而要读出这个 Tm，热位移分析（TSA，Thermal Shift Assay）是通用也可靠的技术路线。

传统的 DSF-TSA 需要引入外源荧光染料来报告蛋白的去折叠过程，步骤相对繁琐，还可能受到染料结合带来的干扰。无标记的 nanoDSF-TSA（微量差示扫描荧光法）则完全不同：它完全不依赖任何染料，直接利用蛋白自身的内源信号。这一"去标记"的进步，让检测变得更接近蛋白的真实状态，也让结果更干净、更可信。

nanoDSF 的原理：内源荧光的温度密码

nanoDSF-TSA 的原理，藏在蛋白的氨基酸序列里。蛋白中的色氨酸（Trp）和酪氨酸（Tyr）这类芳香族氨基酸，天然带有内源荧光，而这种荧光的强度会随周围微环境的变化而改变。当温度逐渐升高、蛋白开始去折叠时，原本埋在疏水核心里的芳香族氨基酸暴露到水性环境中，荧光信号随之发生特征性变化。nanoDSF 正是通过监测这一升温过程中的内源荧光变化，来精确计算蛋白的熔解温度 Tm。

这个"温度密码"的好处是多方面的。首先，它不挑蛋白大小，从酶、抗体、ADC 到膜蛋白都能测；其次，检测浓度范围极宽，从 5 μg/mL 到 250 mg/mL 都能覆盖；更重要的是，平台还配备了背反射模块，可以在测定稳定性的同时监测样品的聚集情况——而聚集，恰恰是许多生物药失活的信号。对研发者来说，一次实验既拿到稳定性数据，又看到聚集倾向，信息密度极高。

Prometheus 平台上的高通量稳定性评价

爱思益普依托 NanoTemper 旗下的 Prometheus NT.48 平台，把 nanoDSF-TSA 的能力转化为可规模化交付的服务。单次可同时检测 48 个样品，而每个样品仅需 10 微升——这种"高通量 + 低消耗"的组合，让它在珍贵样品的筛选场景中格外从容。服务范围覆盖蛋白质稳定性研究、药物分子（蛋白质、肽类及核酸）筛选，以及制剂研究与优化。

一个典型应用是配体结合对蛋白的稳定化评价：当一个小分子与靶蛋白结合，往往会提升蛋白的热稳定性，表现为 Tm 值的升高。爱思益普的案例中，对 P53-Y220C 蛋白进行 nanoDSF 检测，不仅验证了三批次蛋白之间良好的重现性，还观察到 p53 activator 7 带来的稳定化效应，ΔTm 达到 8.31℃。这样一个具体的数字，就是"这个分子确实结合并稳定了靶点"的直接证据。在需要快速判断结合、筛选制剂、把关蛋白质量的每一个环节，nanoDSF-TSA 都提供了一把无标记、可定量的稳定标尺。